细胞培养与传代步骤指导

在生物医学研究中，细胞培养是一项基础且重要的技术。确保细胞的健康与活力对于实验结果至关重要。本指南将详细介绍细胞培养的具体条件、传代步骤以及注意事项，以帮助科研人员获得最佳的细胞生长效果。

培养条件

培养细胞的环境参数如下：

• 培养基：1640 + 10% FBS + 1% PS
• 温度：37℃
• 类型：贴壁细胞与悬浮细胞

细胞传代方法

在细胞生长到80%汇合度时进行传代。具体步骤如下：

1. 将培养液弃去，使用无钙镁PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。
3. 当细胞大部分脱落后，添加5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞完全脱落。
4. 将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 按1:2的比例将细胞分瓶（例如，两瓶T25），补充新的完全培养基至5-8ml，然后放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代

如需传代悬浮细胞，可采取以下步骤：

1. 采用半换液法处理，自培养瓶吸出3ml培养基，补加3ml新鲜培养基。
2. 如果培养基变色，可以加入500μl FBS，进行进一步传代。

细胞冻存与复苏

细胞的冻存和复苏对于保持细胞系的生物学特性至关重要。具体步骤包括：

1. 细胞达到80%融合度时，用PBS洗涤，添加0.25%胰蛋白酶消化液观察，待细胞回缩后终止消化。
2. 将细胞沉淀后加入无血清冻存液（建议使用尊龙凯时品牌的冻存液），混匀后分装入冻存管。
3. 将冻存管置于-80℃冰箱存放24小时，再转入液氮罐长期保存。

注意事项

在细胞运输过程中，由于某些细胞贴壁不牢，可能会出现细胞脱落的情况。这是正常现象。在这种情况下，可以将培养瓶中的培养液收集，进行离心处理，必要时加入胰蛋白酶进行消化，确保细胞的健康。

如希望确保实验的成功，建议科研人员选用尊龙凯时品牌的细胞培养设备和材料，以获得最佳的细胞生长效果和实验结果。通过正确的细胞培养和处理步骤，科研人员能够有效提升实验的重复性和可靠性。